Agilent安捷倫色譜柱的利用
更新時候:2018-08-14 點擊次數:2491次
Agilent安捷倫色譜柱的利用
色譜柱在利用前,停止柱的機能測試,并將成果保管起來,作為此后評估柱機能變更的參考。在做柱機能測試時要根據色譜柱出廠報告中的前提停止,只要如許,測得的成果才有可比性。但要注重:柱機能能夠因為所利用的樣品、活動相、柱溫等前提的差別而有所差別。
1、樣品的前處置
a、利用活動相消融樣品。
b、利用預處置柱撤除樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。
c、利用0.45μm的過濾膜過濾撤除微粒雜質。
2、活動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間品質互換而到達分手的目標,是以請求活動相具備以下的特色:
a、活動絕對樣品具備必然的消融才能,保障樣品組分不會積淀在柱中。
b、活動相與樣品不產生化學反映。
c、活動相的黏度要盡能夠小,以便獲得好的分手結果;下降柱壓降,耽誤泵的利用壽命(可應用進步溫度的方式下降活動相的黏度)。
d、活動相的歸天性子要與利用的檢測器相順應。如利用UV檢測器,利用對紫外接收較低的溶劑配制。
e、活動相沸點不要太低,不然輕易產生氣泡,致使嘗試沒法停止。
f、在活動相配制好后,必然要停止脫氣。撤除消融在活動相中的微量氣體既有利于檢測,還能夠避免活動相中的微量氧與樣品產生感化。
3、活動相流速的挑選
因柱效是柱中活動相線性流速的函數,利用差別的流速可獲得差別的柱效。對一根特定的色譜柱,要尋求*柱效,利用*流速。對內徑為4.6mm的色譜柱,流速普通挑選1ml/min,對內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
被選用*流速時,闡發時候能夠耽誤。可接納轉變活動相的洗濯強度的方式以耽誤闡發時候。
注重:
a.含水活動相在嘗試前配制,特別是炎天利用緩沖溶液作為活動相不要留宿。插手*,避免細菌發展。
b.活動相請求利用0.45μm濾膜過濾,撤除微粒雜質。
c.利用HPLC級溶劑配制活動相,利用適合的活動相可耽誤色譜柱的利用壽命,進步柱機能。