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液相色譜儀HPLC測定豆類食物中異黃酮的含量
更新時候:2017-01-04   點擊次數:2575次
黃豆異黃酮是黃豆壯大中包括的這類次級細胞分泌副產物。如果辦法生物制品中提煉,與雌刺刺刺激素類類有累似分布,是以稱之為生物制品雌刺刺刺激素類類。黃豆異黃酮的雌刺刺刺激素類類作用影向到刺刺刺激素類類脂肪分泌、細胞分泌生物制品學靈可溶性、卵白質拆分、壯大指數公式靈可溶性,是自然生態的胃癌藥劑學防御劑。異黃酮就是一種弱的生物制品雌刺刺刺激素類類,黃豆是科學家具有異黃酮的僅有有價值由來。

本文拔取我國住民平常食用的首要豆成品,對此中雌激素樣活性較強的染料木素和大豆苷元以 及它們對應的糖苷停止定量檢測,從大豆異黃酮的構成和含量兩方面停止闡發評價,進而領會我國豆成品中大豆異黃酮含量的根基環境,為今后周全深切的研討奠基 根本。因為食物中大豆異黃酮的檢測還沒有國度規范,是以選用較通用的液相色譜法為本研討的檢測方式。

1 資料與方式

1.1 資料與試劑

規范品;大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素;正己烷、甲醇(闡發純);甲醇(色譜純)。

1.2 儀器與裝備

Waters 1525液相色譜儀,體系包含515HPLC雙泵、Waters 2996光電二級管列檢測器;DZG-6050真空枯燥箱;KQ-2200超聲波洗濯器。

1.3 方式

1.3.1樣品制備

固體樣品10~45 g,破壞,55℃真空枯燥24h,進一步破壞,每份稱取0.2 g;加5mL正己烷,超聲脫脂10 min,離心(3 000 r/min,3 min)。棄去正己烷;加10mL 80%甲醇,超聲萃取10min,離心(3 000 r/min,3 min),轉移上清液,透風櫥中70℃水浴揮發至干,80%甲醇復溶至0.4mL,過膜,待測。

液體樣品10 mL;加2.5 mL正己烷,超聲萃取10 min,靜置,棄去下層脂肪層。取2 mL溶液。加8 mL甲醇,超聲萃取10 min,離心(3 000 r/rain,3 min),轉移上清液,透風櫥中70℃水浴揮發至干,80%甲醇復溶至0.4 mL,過膜,待測。

1.3.2         HPLC前提

色譜柱為kromasil C18柱(4.6minx250mm,5um);活動相為甲醇(A)/水(B),梯度洗脫前提:0-15 min,30%~70%B,15~30 min。70%-30%B;流速0.6 mL/min;柱溫25℃;進樣量20uL;檢測波長254 nm。

1.3.3規范曲線的繪制

稱取4種對比品各5 mg擺布,而后別離置于10 mL容量瓶中,80%甲醇消融,定容、搖勻,配成約0.5 mg/mL儲備液。再由儲備液別離配成約2、4、8、16、32、64、128 mg/L的7個濃度梯度任務液,HPLC檢測。

2 成果與闡發

2.1 方式學考查

由分手成果圖1可看出,在此色譜前提下4種化合物分手杰出,保留時候適合。

2.1.1線(xian)性干系及檢出限

1.png

由表l歸來常數可確定,在2~128 mg/mL氧化還原電位值規模較內。各峰線性網絡干系杰出人物,需用于按量闡發。進樣量為20uL時,玉米種苷(D)、染色劑木苷(G)、玉米種苷元(Da)、染色劑木素(Ge)的zui 低排除氧化還原電位值(以S/N≥3計)分別為:0.200、0.015、0.400、0.0060ug/mL。

2.1.2重現性

每類樣品選1個樣,每一個樣稱取劃一品質5份。按上述方式制備后對每份樣做含量檢測,檢測成果發明每類樣品中。4種化合物含量的RSD值均≤2.58%,申明此方式重現性好,精確度高。

2.1.3緊密度

每類樣品選1個樣,持續進樣6次,檢測成果發明每類樣品中,4種化合物含量的RSD值均≤2.78%,申明此方式重現性好,緊密度高。

2.1.4收受接管率

每(mei)(mei)類樣(yang)品選(xuan)1個(ge)(ge)樣(yang),在(zai)測得已知(zhi)含量(liang)的樣(yang)品溶液中,按方(fang)式(shi)學準繩,在(zai)0.5~2倍(bei)之(zhi)間取3個(ge)(ge)濃度(du)0.5、l、2,加標,測3次,計較收受(shou)接(jie)管(guan)(guan)率(lv)。每(mei)(mei)類樣(yang)品在(zai)差別 加標倍(bei)數下(xia),4種(zhong)化(hua)合(he)物(wu)的收受(shou)接(jie)管(guan)(guan)率(lv)規模別離為D:88.30%-105.53%。G:84.92%-l 13.7%,Da:93.07%-115.76%,Ge:91.18%-107.92%。RSD規模:1.22%-3.56%。申明此(ci)方(fang)式(shi)加標收受(shou)接(jie)管(guan)(guan)率(lv)較 好,精確度(du)較高。


 

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